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討論血清對ELISA測定的影響因素
閱讀：1029 發(fā)布時間：2018-9-28就血清對ELISA測定的影響做如下討論,。
血清是常用的ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
1． 內(nèi)源性物質(zhì) 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),，可以不同程度影響檢測結(jié)果。進口elisa試劑盒常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體,、嗜異性抗體,、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體,、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM,、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,，從而導(dǎo)致假陽性,。
解決該情況的辦法是：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃,，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）,；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,，使RF降解,。
（2）補體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu),，其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性,。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本,；②用53℃，10 min或56℃,，30 min加熱血清使C1q滅活,。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,，也能造成假陽性,。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效,。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白,、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果,。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定,。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體,；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體,。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性,。解決的辦法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,，從而克服由于上述原因造成的假陽性,。
（6）交叉反應(yīng)物質(zhì) 類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì),。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,，但在用單克隆抗體測定抗原時,，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。
（7）進口elisa試劑盒標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高,、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,，均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用,。