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大鼠ELISA試劑盒實驗測定具體步驟:

閱讀:309          發(fā)布時間:2018-8-20

大鼠ELISA試劑盒實驗測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目,,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔,。 總數=樣品數+9;做雙份檢測時×2,。其余重包裝好放如冰箱中,。 
2.將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清,、體液,、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι ,。 
3.酶標板加上蓋,,37℃反應 90 分鐘。 
4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體,;或甩去酶標板內液體,,再對著吸水紙拍幾下。 不洗,。 
5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入,。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應 60 分鐘,。 
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,,每次浸泡 1 分鐘左右。 
7.將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外),。37℃反應 30 分鐘,。 
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右,。 
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應 20-25 分鐘 (注意:顯色時間供參考,,因用戶實驗室條件差異,,顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色,,后 3-4 孔差別不明顯),。 
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時藍色立轉黃色,。 
11.用酶標儀在 450nm 測定 OD值,。
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