詳細介紹
細胞名稱 牛腎細胞,;MDBK培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一雄性成年牛的腎組織。由Madin SH和Darby NB于1957年2月建立,??捎糜诙繖z測逆轉錄病毒的復制,。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 PN4
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色
牛腎細胞,;MDBK培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
牛腎細胞,;MDBK培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗,。
牛腎細胞;MDBK培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-ETK/BMX/FITC 熒光素標記兔抗人,、大,、小鼠非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-RIP3/FITC 熒光素標記受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C17orf97 17號染色體開放閱讀框97抗體 規(guī)格 0.2ml
SARS S-protein(抗原) 0.5mg
HCN3 英文名稱: 鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RORB 維甲酸相關孤兒受體β抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-RIP3/FITC 熒光素標記受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
irGH(Human Immunoreactive growth hormone) ELISA Kit 人免疫反應性生長激素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-LDH 乳酸脫氫酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh KMT8/Riz1/Riz2 轉錄因子GATA3結合蛋白G3B抗體 規(guī)格 0.2ml
ADM(Human adrenomedullin) ELISA Kit 人腎上腺髓質素 96T
Phospho-PNK1 (Ser114 + Thr118) 英文名稱: 磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體 0.1ml
Alpha chimerin 英文名稱: α1-chimaerin蛋白抗體 0.2ml
Anti-LDH 乳酸脫氫酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
FABP5 英文名稱: 脂肪酸結合蛋白5抗體(上皮細胞型) 0.1ml
趨化因子配體1抗體 anti-cx3cl1 0.1ml
Anti-VIP receptor II/FITC 熒光素標記腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-VEGFR2 (Tyr1175) 磷酸化血管內皮生長因子受體2抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgM/Biotin 生物素化兔抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
牛腎細胞;MDBK培養(yǎng)FABP(Human fatty acid-binding protein) ELISA Kit 人脂肪酸結合蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-MDM2 (Ser166) 磷酸化雙微體2癌基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Jak3 蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體 規(guī)格 0.1ml
E-Cad ELISA Kit 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白 96T
PMCA 英文名稱: 細胞膜鈣轉運ATP酶抗體 0.2ml
phospho-delta 1 Catenin (Tyr291) 英文名稱: 磷酸化δ連環(huán)蛋白抗體 0.1ml
Anti-Phospho-MDM2 (Ser166) 磷酸化雙微體2癌基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml