詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞,;D11E8A1E6培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產生單克隆抗體,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠雜交瘤細胞;D11E8A1E6培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗,。
小鼠雜交瘤細胞;D11E8A1E6培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-HCV-NS1/FITC 熒光素標記丙型肝炎病毒-NS1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)/FITC 熒光素標記磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BAGE3 /抗原2.3抗體 規(guī)格 0.2ml
5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A) 5-羥色胺受體1A(多肽) 0.5mg
GRAMD3 英文名稱: 丙型肝炎病毒-NS3反轉錄激活蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)/FITC 熒光素標記磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ALT1 谷丙氨酸氨基轉移酶1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-BRCA1(Ser988) 磷酸化癌易感基因1抗體 規(guī)格 0.1ml
復合消化液 10ml
phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1214) 英文名稱: 磷酸化血管內皮生長因子受體2抗體 0.1ml
DHRS3 英文名稱: 短鏈脫氫還原酶3抗體 0.2ml
Anti-ALT1 谷丙氨酸氨基轉移酶1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
GGCX 英文名稱: γ-谷酰羧化酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APG4B/AUTL1 自噬相關蛋白4B抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-16/FITC 熒光素標記白細胞介素-16抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.1ml
Anti-CD150/SLAM/FITC 熒光素標記CD150抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠雜交瘤細胞;D11E8A1E6培養(yǎng)Synuclein mouse ELISA kit 小鼠突觸素Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-Cx40/FITC 熒光素標記間隙連接蛋白40抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml
dog IgG/APC 熒光素APC標記狗IgG 0.1ml
LANPL 英文名稱: 富含亮酸樣酸性核蛋白抗體 0.2ml
(2NP-AOZ)呋喃唑酮代謝物單克隆抗體 小鼠單抗 0.02
Anti-Cx40/FITC 熒光素標記間隙連接蛋白40抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠雜交瘤細胞,;D11E8A1E6培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。