詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞(抗P185erbB-2);A22培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 可產(chǎn)生抗P815erbB-2的單克隆抗體,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10% FBS
傳代方法 1:
2,。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
小鼠雜交瘤細胞(抗P185erbB-2),;A22培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
小鼠雜交瘤細胞(抗P185erbB-2),;A22培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-NMDAR2A (Tyr1325) /FITC 熒光素標記磷酸化谷氨酸受體2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-CEA/HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CD167a抗體 Anti-CD167a/DDR1 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgM/Gold 膠體金標記的羊抗小鼠IgM 0.5ml
FK506 binding protein associated protein 英文名稱: FK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體(他克莫司相關(guān)蛋白) 0.2ml
Rhesus antibody Rh PMA/Prostate Mucin Antigen 前列腺粘蛋白抗原抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-CEA/HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PP(Mouse Protein Phosphatase) ELISA Kit 小鼠蛋白磷酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CBFA1/RUNX2/FITC 熒光素標記成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EGR2 早期生長反應蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
(MAG Ab)ELISA Kit 大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體 96T
Myt1 英文名稱: 髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體 0.2ml
ADCY1 英文名稱: 腺苷酸環(huán)化酶1抗體 0.2ml
Anti-CBFA1/RUNX2/FITC 熒光素標記成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Synaptogyrin 3 英文名稱: 神經(jīng)細胞囊泡循環(huán)蛋白3抗體 0.2ml
Estrogen Sulfotransferase 英文名稱: 雌激素轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml
磷酸化β-連環(huán)蛋白抗體 Anti-p-β catenin 0.1ml
Anti-Ubiquitin/FITC 熒光素標記泛素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-HOMER3(Thr36) 磷酸化HOMER3蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
CCL26(Eotaxin 3) 嗜酸粒細胞趨化蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠雜交瘤細胞(抗P185erbB-2),;A22培養(yǎng)TNF- Beta(Human Tumor necrosis factor Beta) ELISA KIT 人壞死因子βMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Glasses Snake poison Protein 兔抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體(眼鏡蛇)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Goat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
BK(Human Bradykinin) ELISA Kit 人血管舒緩激肽 96T
RAB38 英文名稱: G蛋白結(jié)合蛋白RAB38抗體 0.2ml
phospho-CREB-1(Ser142) 英文名稱: 磷酸化CREB-1抗體 0.1ml
Anti-Glasses Snake poison Protein 兔抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體(眼鏡蛇)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠雜交瘤細胞(抗P185erbB-2),;A22培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。