詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞,;I41培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗,,可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠雜交瘤細(xì)胞,;I41培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
小鼠雜交瘤細(xì)胞;I41培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pThr204)+phospho ERK2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗人、大,、小鼠磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
成纖維細(xì)胞生長因子受體2抗體 Anti-FGFR2 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FOXE3 英文名稱: 叉頭蛋白E3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Stathmin 1 (Ser24) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
PIIINP 人III型前膠原肽(N端)Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Jun B 活化蛋白激酶B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NT5C1A 胞質(zhì)5'核苷酸酶1A抗體 規(guī)格 0.2ml
T4 DNA ligase T4 DNA連接酶 26ul (25次連接)
TNFAIP1 英文名稱: 壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體 0.1ml
Phospho-CHK2 (Thr68) 英文名稱: 磷酸化細(xì)胞周期檢測點激酶2抗體 0.1ml
Anti-Jun B 活化蛋白激酶B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人絲酸/蘇酸蛋白磷酸酶 96T
RASSF6 英文名稱: RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCM2 染色體維持缺陷蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
CEA/CD66(Human carcinoembryonic antign) ELISA Kit 人癌胚抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C1orf156 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框156抗體 0.2ml
Anti-HOXA10 HOXA10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠雜交瘤細(xì)胞,;I41培養(yǎng)Plant Vitamin B12,VB12 ELISA Kit 植物維生素B12Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DLX4/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗DLX4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cyclin C 周期素C抗體 規(guī)格 0.1ml
BSA/Cy5.5 熒光素Cy5.5標(biāo)記血清白蛋白 0.1ml
KLF6 英文名稱: 轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh WNK1 賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-DLX4/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗DLX4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠雜交瘤細(xì)胞;I41培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。