詳細介紹
細胞名稱 人胚腎細胞(SV40T基因修飾),;293T/17培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 293細胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T,。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化5-15分鐘,。1:4-1:8,。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(17+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚腎細胞(SV40T基因修飾),;293T/17培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
人胚腎細胞(SV40T基因修飾),;293T/17培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
人胚腎細胞(SV40T基因修飾),;293T/17培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。
Anti-FANCD2(phospho Ser222) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠磷酸化FANCD2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標(biāo)記伴肌動蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C12ORF49 12號染色體開放閱讀框49抗體 規(guī)格 0.2ml
PACAP/VIP receptor 腺苷酸環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體(抗原) 0.5mg
Centromeric histone H3-like protein-2 英文名稱: 組蛋白H3樣蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF24 環(huán)指蛋白24抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標(biāo)記伴肌動蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大,、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FKSG14/Centromere protein K 著絲粒蛋白K 規(guī)格 0.2ml
MDC/CCL22(Human Macrophage-Derived Chemokine) ELISA kit 人巨噬細胞來源的趨化因子 96T
phospho-MAP1LC3A(Ser12) 英文名稱: 磷酸化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
ACTH (7-23) 英文名稱: 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體 0.1ml
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大,、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人核糖核酸酶A2(RNASE2)ELISA試劑盒人96T6.25-400 U/mL大鼠脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白5(FATP5)ELISA試劑盒,,英文名:FATP5 ELISA Kit豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒,英文名:IL12B ELISA KiISA Kit for Human Adenosine receptor A1小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒,,英文名:Free-T3 ELISA Kit人載脂蛋白B(Apo-B)ELISA試劑盒人96T78-5000 ng/mL小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒,,英文名:CT-1 ELISA KiISA Kit for Human Alpha-actinin-3小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒,英文名:GHRP ELISA Kitβ羥丁酸(beta-Hydroxybutyric acid)ELISA試劑盒通用96T0.156-10 umol/L小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒,,英文名:NGB ELISA KiISA Kit for Chondroitin sulfate小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒,,英文名:MDC/CCL22 ELISA Kit
人胞裂蛋白5(SEPT5)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠尾加壓素2受體(UTS2R)ELISA試劑盒,英文名:UTS2R ELISA KiISA Kit for Human Chondroitin sulfate proteoglycan 4小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒,,英文名:CA ELISA KiISA Kit for Human Carbohydrate Antigen 50小鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒,,英文名:BACE1 ELISA KiISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 3小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP-3 ELISA KiISA Kit for Human N(G), N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2小鼠粘蛋白1(MUC1)ELISA試劑盒,,英文名:MUC1 ELISA KiISA Kit for Human Pro-epidermal growth factor小鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白2(MAP2)ELISA試劑盒,,英文名:MAP2 ELISA KiISA Kit for Human Tissue factor小鼠輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)ELISA試劑盒,英文名:NEFL ELISA Kit
鼠兔通用SP(HRP)試劑盒 140片 進口原料
Ubiquitin D 英文名稱: 泛素D抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATF2(Ser94) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格 0.1ml
N-ras 原癌基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DUSP13 英文名稱: 雙特異性磷酸酶13抗體 0.2ml
Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人胚腎細胞(SV40T基因修飾),;293T/17培養(yǎng)Anti-HBME-1 /FITC 熒光素標(biāo)記間質(zhì)細胞HBME1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體 規(guī)格 0.2ml
5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4) 5-羥色胺受體4抗原 0.5mg
GRO Alpha 英文名稱: 生長調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體GROa 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml