詳細(xì)介紹
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
傘枝梨頭霉PCR檢測試劑盒供應(yīng)商 | Absidia corymbiferaPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
碳銨標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 8000-73-5 Ammonium Carbonate (AS) 進(jìn)口、國產(chǎn) 2g
化銨標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 12125-02-9 Ammonium Chloride 進(jìn)口,、國產(chǎn) 200mg
二銨標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 7783-28-0 進(jìn)口,、國產(chǎn) 1g
異戊巴比CII標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 57-43-2 Amobarbital CII 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
阿莫地標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 6398-98-7 Amodiaquine Hydrochloride 進(jìn)口,、國產(chǎn) 500mg
阿莫平標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 14028-44-5 Amoxapine 進(jìn)口,、國產(chǎn) 200mg
阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 61336-70-7 Amoxicillin 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
阿莫西林相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 進(jìn)口,、國產(chǎn) 15mg
RT4(人膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 T-24(膀胱變移細(xì)胞癌)
CL-0111HL-7702(人肝正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
IgG2b Others Mouse 小鼠 IgG2b-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
OP9小鼠骨髓質(zhì)細(xì)胞 OP9 mouse bone marrow somal cells a-MEM培養(yǎng)+20%FBS
LIF Protein Mouse 重組小鼠 LIF 蛋白 (His 標(biāo)簽)
小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng) 100mL
傘枝梨頭霉PCR檢測試劑盒供應(yīng)商
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便,、快速PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)