詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
牛PCR檢測試劑盒進(jìn)口 | Brucella bovisPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:
實(shí)驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
牛PCR檢測試劑盒進(jìn)口CA10英文名稱:BCMP101人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)免疫試盒
IL-18R alpha/CD218a英文名稱:BRLF1人血管緊張Ⅱ受體1體(ATⅡR1)免疫試盒
CTCF英文名稱:BDNF人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)免疫試盒
CD1a英文名稱:BACE2人血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試盒
Phospho-CHK2 (ser19)英文名稱:BHLHB5人血管緊張Ⅱ(2-7)免疫試盒
Clathrin heavy chain英文名稱:BPNT1人血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)免疫試盒
CD168英文名稱:BRSK2人血管緊張Ⅰ受體體(ANG-ⅠR)免疫試盒
C2orf24英文名稱:BRWD3人血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)免疫試盒ZNF473英文名稱:TRAP1FAM96B蛋白體
ZFAND5英文名稱:TEM8胚胎鋅指樣蛋白1體
ZNF146英文名稱:TSPAN15FAM29蛋白體
ZNF23英文名稱:TNMDMaFF相關(guān)蛋白體
ZDHHC17英文名稱:TXA2R凝血因*7體
ZNF312B英文名稱:TLR11FEM1B體
ZBTB22英文名稱:THBS1纖維母細(xì)胞生長因子3體
ZBTB12英文名稱:TERT纖維母細(xì)胞生長因子4體
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論,。