詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 分類(lèi) |
牛紐布病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商 | Bovine Nebovirus(BoNeV)RTPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),,探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
牛紐布病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商phospho-c-ABL (Tyr115)英文名稱(chēng):Annexin VI人型肝炎病前S2原(HBV preS2Ag)免疫試盒
phospho-c-Abl (Thr754 + Thr735) 英文名稱(chēng):beta-Amyloid(25-35)人型肝炎病前S2體(HBV preS2Ab)免疫試盒
phospho-c-ABL (Tyr245)英文名稱(chēng):Angiotensin I人型肝炎病核心體IgM(HBcAb-IgM)免疫試盒
phospho-c-ABL(Thr413) 英文名稱(chēng):Adrenomedullin人型肝炎病核心體IgG(HBcAb-IgG)免疫試盒
phospho-c-ABL(Tyr204)英文名稱(chēng):Arfaptin 2人型肝炎病核心體(HBcAb)免疫試盒
phospho-c-ABL (Thr754)英文名稱(chēng):AVPR2人型肝炎病表面體(HBsAb)免疫試盒
Cenexin1英文名稱(chēng):ASC人型肝炎病X原(HBxAg)免疫試盒
C5orf19 英文名稱(chēng):Afadin人型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)免疫試盒英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA Kit,48T/96T 1g
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品兔子免疫球蛋白E(IgE)ELISA Kit,48T/96T 200mg
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,,48T/96T 25mg
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品人免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,,48T/96T 125mg
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,,48T/96T 350mg
英文名稱(chēng)對(duì)照品大鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,48T/96T 200mg
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,,48T/96T 200mg
英文名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)品人可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA Kit,,48T/96T 200mg
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。