詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
埃可病毒PCR檢測試劑盒 | ECHO VirusRTPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
埃可病毒PCR檢測試劑盒phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr198) 化P27體/周期依賴激酶抑制體進(jìn)口/國產(chǎn)DNMBP 動(dòng)力結(jié)合蛋白DNMBP體
P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體體/呤受體體進(jìn)口/國產(chǎn)DPH2 白喉酰胺生物合成樣蛋白2體
P2Y4 P2Y4受體體進(jìn)口/國產(chǎn)CRMP5 二嘧啶酶相關(guān)蛋白5體
P311 protein 神經(jīng)再生相關(guān)蛋白體進(jìn)口/國產(chǎn)Phospho-CRMP2 (Thr514+Ser518) 化二嘧啶酶樣2體
P4HB 蛋白二硫鍵異構(gòu)酶P4HB體進(jìn)口/國產(chǎn)CRMP4/DRP3 衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4體
p38MAPK/MAPK14/p38Alpha 絲裂原活化蛋白激酶p38α體進(jìn)口/國產(chǎn)phospho-VAV1(Tyr160) 化鳥苷轉(zhuǎn)換因子VAV1體
P38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182) 化-絲裂原活化蛋白激酶p38體(P-p38 MAPK)進(jìn)口/國產(chǎn)phospho-VAV1(Tyr174) 化鳥苷轉(zhuǎn)換因子VAV1體Nuclear Pore Complex Proteins英文名稱:LOXL2化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPε體
HSV 1英文名稱:Lumican血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1體
NOTUM英文名稱:Listeriolysin補(bǔ)體C1QL4鏈多肽體
NPAS3英文名稱:LCMT119號染色體開放閱讀框2體
NPDC1英文名稱:LETMD1卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白62體
NRARP英文名稱:LOXL4卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白64體
NRSN1英文名稱:Lactoferrin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白72體
Neugrin英文名稱:Laminin 1+2卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白73體
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。