詳細介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
鏈球菌組PCR檢測試劑盒無乳,?說明書 | Group B Streptococcus spp.(GBS) BPCR ? | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細胞,、血液、細菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
鏈球菌組PCR檢測試劑盒無乳?說明書NME1/Nm23-H1/NDKA 腫瘤抑制因體進口/國產(chǎn)CCDC93 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93體
Nm23-H2 腫瘤抑制因體進口/國產(chǎn)CCDC96 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96體
NNT 煙酰胺核苷轉(zhuǎn)酶體進口/國產(chǎn)CHCHD5 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD5體
Nociceptin 孤菲肽/痛敏肽體進口/國產(chǎn)CHCHD6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6體
Nociceptin receptor 孤菲肽受體/痛敏肽受體體進口/國產(chǎn)CHCHD8 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8體
Nogo R 軸索過度生長抑制因子受體/Nogo受體體進口/國產(chǎn)Slc22a5 溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5體
Nogo-A 軸索過度生長抑制因子-A體進口/國產(chǎn)NPFF/FMRFamide 啡痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF體NOB1英文名稱:Phospho-MEK4 (Ser80)碳酐酶7體
phospho-NFATC4 (Ser168 + Ser170)英文名稱:Methamphetamine(4D2)膠原蛋白和鈣結(jié)合表皮生長因子結(jié)構(gòu)域1體
NR1H4英文名稱:Mitoferrin 1卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B體
NKAP英文名稱:phospho Met (Tyr1365)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16體
NLE1英文名稱:phospho-MEK1 (Ser298)細胞色B還原酶1體
Phospho-eNOS (Ser116)英文名稱:MASP2號染色體開放閱讀框76體
Phospho-eNOS (Ser615)英文名稱:MTLR3號染色體開放閱讀框19體
Phospho-eNOS (Ser632)英文名稱:MLT5細胞色c氧化酶5A體
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng),。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細胞,、活PCR技術(shù)概論。