詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào),;
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 分類(lèi) |
禾谷鐮刀菌PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口 | Fusarium graminearumPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),,探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染,、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
MOG 髓鞘少樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)NIFK KI67相互作用蛋白體
Moesin 膜突蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)phospho-NIFK/MKI67IP(Thr234) 化KI67相互作用蛋白體
Mouse IgA 兔小鼠IgA體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)TACC1 癌、胃癌原GA55體
M-RAS/Mras 原癌因M-ras體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ABCF3 三苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞3體
RHEB Ras蛋白組織同源類(lèi)似物RHEB蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ABHD1 肺α/β水解酶蛋白1體
Mre11/HNGS1 DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ABHD13 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13體
Phospho-Mre11 (Ser676) 化DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ABHD14B 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B體NKp80英文名稱(chēng):LST17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53體
CD112英文名稱(chēng):LEO17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框59體
Nephrin英文名稱(chēng):Phospho-LRP6(Thr1479)7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64體
NR5A2/LRH1英文名稱(chēng):phospho-LCK(Tyr394)8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框12體
NCX1英文名稱(chēng):LRP58號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框31體
NCX3英文名稱(chēng):phospho-LRP5(Thr1492)8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框33體
NMDAR1英文名稱(chēng):phospho-LRP1(Ser4523)Ⅱ型膠原蛋白體
phospho-Nrf2 (Ser40)英文名稱(chēng):LKB1軟骨蛋白1體
禾谷鐮刀菌PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。