詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞,、血液,、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種,、基因準確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
鐮刀菌通用PCR檢測試劑盒 | Fusarium spp.PCR | PCR檢測試劑盒 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術(shù)概論,。
MTLR 胃動受體體進口/國產(chǎn)CCDC7 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7體
MTTP 微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白進口/國產(chǎn)CCDC80 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80體
MVD 羥戊脫羧酶體進口/國產(chǎn)CD163L1 CD163蛋白樣1體
CA15-3/Muc1 粘蛋白-1/上皮膜原體進口/國產(chǎn)CDAN1 先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1體
Muc2 粘蛋白-2/上皮膜原2體進口/國產(chǎn)CDK2AP2 細胞周期依賴激酶2相關(guān)蛋白2體
mucin3/Muc3 粘蛋白-3體進口/國產(chǎn)CEACAM21 癌胚原相關(guān)細胞粘附分子21體
mucin 5B/Muc5B 粘蛋白-5B體進口/國產(chǎn)CDKAL1 周期依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1體NAP1L1英文名稱:MEOX 2化δ連環(huán)蛋白體
N-cadherin英文名稱:MRGX1化δ連環(huán)蛋白體
NCoR1英文名稱:MAGEA1122號染色體開放閱讀框43體
Nephrin英文名稱:MAS1LC2CD3蛋白體
Nestin英文名稱:Maltose Binding Protein/MBP半胱胺蛋白酶蛋白14體
Nestin英文名稱:Myosin-XVIIIb3號染色體開放閱讀框55體
Neurobeachin英文名稱:MAL3號染色體開放閱讀框65體
Neuroserpin英文名稱:Maltoporin3號染色體開放閱讀框14體
鐮刀菌通用PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性,。