詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
伊派病毒PCR檢測試劑盒進(jìn)口 | Ippy Virus(IPPYV)RTPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
伊派病毒PCR檢測試劑盒進(jìn)口Clenbuterol Hydrochloride20mg/支TSPY1 丸特異定蛋白質(zhì)編碼Y1體ELISA Kit for Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1 (LOX1)
Clenbuterol Related Compound B20mg/支DDCT/DDT D型多巴色脫羧酶ELISA Kit for Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1 (LOX1)
Clidinium Bromide20mg/支Cyclophilin B 親環(huán)蛋白PPIB體ELISA Kit for Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1 (LOX1)
20mg/支BCAS2 癌相關(guān)蛋白2體ELISA Kit for Tachykinin Receptor 2 (TACR2)
Climbazole20mg/支PLRP1/PNLIPRP1 胰脂肪酶相關(guān)蛋白1體ELISA Kit for Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH)
Clindamycin Hydrochloride20mg/支BMP15 骨形態(tài)發(fā)生蛋白15體ELISA Kit for GATA Binding Protein 2 (GATA2)
20mg/支BCAT1 胞漿支鏈轉(zhuǎn)酶體ELISA Kit for GATA Binding Protein 2 (GATA2)
Clindamycin Phosphate20mg/支BMP5 骨形態(tài)發(fā)生蛋白5體ELISA Kit for Protein Kinase Inhibitor Beta (PKIb)IND99%500gGP5供HPLC法Anti-Aurora A 有絲分裂激酶A體Anti-Aurora A 有絲分裂激酶A體48T/96T≥98.0%(GC)25gβLT
BS99%100gC2a供HPLC法Anti-Aurora B 有絲分裂激酶B體Anti-Aurora B 有絲分裂激酶B體48T/96T98%100gALT
BS99%25gC2b供檢查用Anti-Aurora C 有絲分裂激酶B體Anti-Aurora C 有絲分裂激酶B體48T/96T98%25gAMS
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。