詳細(xì)介紹
PCR基本操作:?
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 分類(lèi) |
足馬杜拉分枝菌PCR檢測(cè)試劑盒 | Madurella mycetomatisPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào),;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),,探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
足馬杜拉分枝菌PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染,、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論,。
NKA 神經(jīng)激肽A體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC63 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63體
NKB 神經(jīng)激肽B體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC8 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8體
NKG2A NK細(xì)胞受體2A體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC83 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83體
NKG2C NK細(xì)胞受體2C體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC87 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白87體
NKG2D/CD314/KLRK1 NK細(xì)胞受體2D體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ANP 心鈉體
NKR/Neurokin B receptor 神經(jīng)激肽B受體體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC88B/BRLZ/HkRP3 大亮拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白體
Nm23/NME1/NME2 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC92 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92體肉桂標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CCDC16/ZNF83 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ACA ELISA Kit 大鼠中性粒/中心體體人(T)ELISA Kit,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)1-壬標(biāo)準(zhǔn)品*CCDC21 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)M-AChR(Human muscarinic acetylcholine receptor) ELISA Kit 人蕈型酰膽受體小鼠(T)ELISA Kit,,48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)2-壬標(biāo)準(zhǔn)品*CCDC52 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)PI Ab-IgG/IgM)ELISA Kit 大鼠脂酰肌體IgG/IgM豬(T)ELISA Kit,,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)十八標(biāo)準(zhǔn)品*CCDC6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6體(狀狀癌編碼蛋白)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Gp49a(Human glycoprotein 49A) ELISA Kit 人糖蛋白49A大鼠(T)ELISA Kit,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)