詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
碩大利什曼原蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書 | Leishmania majorPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取、cDNA合成,、qPCR
碩大利什曼原蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書MRP7/ABCC10 多藥耐藥相關(guān)蛋白7體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ALAD δ酰脫水酶體
MRP8/ABCC11 多藥耐藥相關(guān)蛋白8體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)TPTE 腫瘤/丸原44體
MRP9/ABCC12 多藥耐藥相關(guān)蛋白9體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ALDH16A1 醛脫酶16家庭A1體
MrpL12 線粒體核糖體蛋白L12體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ALG11 天門冬酰胺連接糖化11體
MrpL28 線粒體核糖體蛋白L28體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ALS2CR4 肌縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4體
MSH Alpha 促黑細(xì)胞α體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)AMIGO3 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3體
MSH γ1 促黑細(xì)胞γ1體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)AMN1 細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1體鉍鈉中藥對(duì)照藥材進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)MEGF5/Slit3 復(fù)合型表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)LTB(Human heat-labile enterotoxin B subunit) ELISA Kit 人不耐熱腸B亞單位大鼠狀過化物酶體(TPO-Ab)ELISA Kit,,48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)結(jié)晶碳鈉中藥對(duì)照藥材*TRIM29/ATDC 共濟(jì)失調(diào)細(xì)血管擴(kuò)張癥D相關(guān)蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CT(Human Chlamydia trachomatis) ELISA Kit 人眼衣原體體犬雙(DHT)ELISA Kit,,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)鉻鈉中藥對(duì)照藥材*UBE2V1/UEV1A 泛結(jié)合酶E2變異體1體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ANG ELISA Kit 大鼠血管生長(zhǎng)人雙(DHT)ELISA Kit,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)亞鈷鈉中藥對(duì)照藥材*VHLH/Von Hippel Lindau 視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白體(逢希伯-林道氏?。┻M(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Human schistosoma ELISA Kit 人血吸蟲小鼠雙(DHT)ELISA Kit,48T/96T 進(jìn)口,、國(guó)產(chǎn)
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。