詳細(xì)介紹
PCR基本操作:?
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 分類(lèi) |
海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商 | Perkinsus marinusPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),,探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染,、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
Alprazolam Related Compound A20mg/支RND3/RHOE Rho家族GTP酶3體ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1)
Alprostadil20mg/支RSRC2 食道癌抑制生長(zhǎng)蛋白體ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1)
Altretamine20mg/支PARG1/Rho GTPase activating protein 29 Rho GTP酶激活蛋白29體ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1)
Dried Aluminum Hydroxide Gel20mg/支SASH1 腫瘤抑制因PEPE1體ELISA Kit for Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)
Amantadine Hydrochloride20mg/支SESN3 Sestrin3體ELISA Kit for Thyroid Peroxidase (TPO)
Amcinonide20mg/支LSP1 白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白體ELISA Kit for Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
Amifostine20mg/支E-cadherin/CD324 上皮鈣粘附分子體ELISA Kit for Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
Amifostine Disulfide20mg/支RUNX1T1/ETO 周期D相關(guān)蛋白體ELISA Kit for Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)Carboxypeptidase B1英文名稱(chēng):Acid sphingomyelinase人載脂蛋白A4(Apo-A4)免疫試盒
CRABP2英文名稱(chēng):ANT-1人載脂蛋白A2(apo-A2)免疫試盒
C2orf80英文名稱(chēng):ALS2CR8人載脂蛋白A1(Apo-A1)體 免疫試盒
phospho-CD32B(Tyr291)英文名稱(chēng):ATP6IP2人載脂蛋白A1(Apo-A1)免疫試盒
Complement C3英文名稱(chēng):Azurocidin人運(yùn)狀蛋白/前白蛋白(TTR)免疫試盒
CD66c英文名稱(chēng):Alpha-Synuclein人孕烯(PREG)免疫試盒
CPEB1英文名稱(chēng):beta-Actin (Loading Control)人孕受體(PGR)免疫試盒
CST7英文名稱(chēng):beta-Amyloid 1-42 (CT)人孕和adipoQ 受體家族成員Ⅶ(PAQR7)免疫試盒