詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
饒氏無綠藻PCR檢測試劑盒說明書 | Prototheca zopfiiPCR | PCR檢測試劑盒 |
實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計,、RNA提取、cDNA合成,、qPCR
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
20mg/支NESG1/CCDC19 鼻咽上皮細(xì)胞特異性蛋白1體ELISA Kit for Elastase 2, Neutrophil (ELA2)
Clorazepate Dipotassium CIV20mg/支FOXL2 小瞼裂綜合征蛋白BPES體ELISA Kit for Caspase 9 (CASP9)
20mg/支XPC DNA補(bǔ)充修復(fù)XPC細(xì)胞蛋白體ELISA Kit for BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid)
20mg/支EPHA10 酪蛋白激酶受體A10體ELISA Kit for BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid)
20mg/支TP53I8/EI24 腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)蛋白8ELISA Kit for BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid)
Cloprostenol Sodium20mg/支EVC2 膜蛋白EVC2體ELISA Kit for Caspase 5 (CASP5)
Clorsulon20mg/支BMPR1B 骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B體ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)
Clotrimazole20mg/支Vinculin 粘著斑蛋白體ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)C14ORF140英文名稱:phospho-c-Jun(Thr93)人絲蟲病體(IgG4)免疫試盒
CHAC2英文名稱:Phospho-c-Kit (Tyr730)人絲肽酶抑制,Kazal 1型(SPINK1)免疫試盒
C15orf62英文名稱:C1orf148人絲肽酶2甘露聚糖結(jié)合凝集(MASP2)免疫試盒
C15orf41英文名稱:CTLA4人絲蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)免疫試盒
CNGA2英文名稱:CAMSAP1人絲蛋白酶HTRA1(HTRA1)免疫試盒
CANX英文名稱:Claudin 1人絲/蘇激酶24(STK24)免疫試盒
CRMP2英文名稱:C1orf149人絲/蘇蛋白酶(STK)免疫試盒
CYP2E1英文名稱:phospho-c-Kit(Tyr823)人絲/蘇蛋白激酶PAK4(PAK4)免疫試盒
饒氏無綠藻PCR檢測試劑盒說明書原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。