詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒 | Respiratory Syncytial Virus(RSV)RTPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計,、RNA提取、cDNA合成,、qPCR
呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒UBE2D1英文名稱:SH3KBP1原癌因酪蛋白激酶FES體
UBE2C英文名稱:SCAP2成纖維細(xì)胞生長因子16體
SUMO-1英文名稱:SLAP2成纖維細(xì)胞激活蛋白α體
UBE2D2英文名稱:SLP76Fas相關(guān)酶1體
Ube2G2英文名稱:phospho-SLP76 (Tyr145)葉受體4體
Ube2L3英文名稱:phospho-SLP76 (Tyr113)Wnt信號受體蛋白體
Ube2N英文名稱:SOCS7化載脂蛋白A1體
UGCG英文名稱:STAP2化載脂蛋白A1體CFHL5英文名稱:CCDC148人凝血酶原段F1+2(F1+2)免疫試盒
CG028/C7orf28A英文名稱:CCDC153人凝血酶血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)免疫試盒
CGBP英文名稱:CCDC160人凝血酶受體(TR)免疫試盒
CGGBP1英文名稱:CCDC22人凝血酶凝血酶復(fù)合物(TAT)免疫試盒
CGK2英文名稱:CCDC25人凝血酶(Thrombin)免疫試盒
CGNL1英文名稱:CCDC28A人凝溶膠蛋白(Gelsolin)免疫試盒
CGREF1英文名稱:CCDC28B人凝聚(CLU)免疫試盒
CHAD英文名稱:CT74人檸檬合成酶,線粒體(CS)免疫試盒
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。