詳細(xì)介紹
PCR基本操作:?
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
登革熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
登革熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
HEC-1-A(人子宮內(nèi)膜細(xì)胞)大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)
溶葡球酶,溶葡萄球酶 質(zhì)量BR,5000U/Pack Lysostaphin
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae銅綠假單胞 Pseudomonas aeruginosa
百里香,麝香草 質(zhì)量AR Thymol
大鼠膀胱成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)LS-174T(人結(jié)腸細(xì)胞)
亞蘭,亞藍(lán) 質(zhì)量BS Methylene Blue
宇佐曲 Aspergillus usamii中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii
Sulfo NHS;N-羥硫代琥珀酰亞 質(zhì)量>99%,BR sulfo-NHS
球亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis嗜熱鏈球 Streptococcus thermophilus
沃妙林 質(zhì)量>97%,BR Valnemulin HCl
黑綠木刺芹側(cè)耳 Pleurotus eryngii
泰樂(lè) 質(zhì)量>95%,BR Tylosin phosphate
小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠成纖維細(xì)胞
左氧星 質(zhì)量>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Levofloxacin HCl
HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞人動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)
左氧星(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Levofloxacin HClLRCH3英文名稱:phospho-IRS1(Ser302)鈉鉀ATP酶通道蛋白體
LRRC10英文名稱:phospho-IRS1(Ser332 + Ser336)AGXT2L2蛋白體
LRCH2英文名稱:phospho-IRS1(Ser612)β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1體
LRDD英文名稱:phospho-IRS1(Tyr1222)錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6體
LAMR1(CT)英文名稱:phospho-IRS1(Tyr895)二苷核糖轉(zhuǎn)移酶3體
LAMR1英文名稱:phospho-IRS1(Ser1101)二苷核糖轉(zhuǎn)移酶5體
phospho-LEF1(Ser42)英文名稱:IL-28B/IL-28C苷單脫酶1體
LAP1英文名稱:IER2紅細(xì)胞蛋白Ank1體