詳細介紹
原理是由一對引物介導,,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
大豆RR/SS PCR檢測試劑盒說明書 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細胞,、血液、細菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加,。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
大豆RR/SS PCR檢測試劑盒說明書 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum
α-萘黃 質(zhì)量>98%, 進口 α-Naphthoflavone
豇豆慢生根瘤 Bradyrhizobium vigna保加利亞桿 Lactobacillus bulgaricus
紫銨 質(zhì)量ACS Murexide
植物桿 Lactobacillus plantarum酒假絲酵母 Candida kefyr
3,3'-二萘 質(zhì)量>97%,進分 3,3'-Dimethylnaphthidine
CRT(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)BC3H1(小鼠瘤細胞)
羥 質(zhì)量AR Hydroxylammonium chloride
根瘤 Rhizobium sp.豌豆根瘤 Rhizobium leguminosarum
金O 質(zhì)量BS Auramine O
大鼠大隱靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)MDCK(犬腎細胞)
2,3-二巰磺鈉 質(zhì)量>98% Sodium 2,3-dimercapto-1-propanesulfonate
球型接合酵母 Zygosaccharomyces globiformis頂孢 Cephalosporium acremonium
鈰銨 質(zhì)量AR,>98% Ammonium ceric sulfate
地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis桔青 Penicillium citrinum
硫代酰 質(zhì)量AR, ≥99.0% ThioacetamideLRRC62英文名稱:HSP1ADP核糖化因子1體
LPAP英文名稱:HGF型肝炎病X相關(guān)蛋白2體
LGI4英文名稱:HDAC2ADP核糖化因子5體
LYL1英文名稱:large S proteinADP核糖化因子結(jié)合蛋白體
L-Citrulline英文名稱:ErbB 4ADP核糖化因子GTP酶激活蛋白1體
Legumain英文名稱:BRI3BPADP核糖化因子相關(guān)蛋白1
LDHD英文名稱:HCV Core protein琥珀裂解酶體
LYK5英文名稱:HCV-NS1酰tRNA合成酶體
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng),。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,。可直接用臨床標本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細胞,、活PCR技術(shù)概論。