詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
禽流感病毒PCR檢測試劑盒進(jìn)口 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
禽流感病毒PCR檢測試劑盒進(jìn)口 球亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis胰凝蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)
去澤拉木(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Demethylzeylasteral
大麗花輪枝孢泡盛曲 Aspergillus awamori
去駱駝蓬(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標(biāo)準(zhǔn)品 Harmine hydrochloride
人上皮細(xì)胞*培養(yǎng)P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)
路路通內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Liquidambaric lactone
小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)百脈根根瘤 Rhizobium loti
巖大戟內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標(biāo)準(zhǔn)品 Jolkinolide B
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae植物桿 Lactobacillus plantarum
甘油三油酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標(biāo)準(zhǔn)品 Glycerine trioleate
豇豆慢生根瘤 Bradyrhizobium vigna雙孢蘑菇
長春花(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Vinblastine
U-87 MG(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)敘利亞倉鼠胰島β細(xì)胞
長春花 質(zhì)量HPLC≥98%,,BR Vinblastine
湯卜遜門氏 Salmonella thompson小鼠腮細(xì)胞*培養(yǎng)
脫水長春(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量HPLC≥95%,,標(biāo)準(zhǔn)品 AnhydrovinblastinePDGF-D英文名稱:ME1化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激酶2α體
PAR3英文名稱:MHC class I組織蛋白酶A體
PCDHB13英文名稱:MFAP3LCD34體
PSMC1英文名稱:MTTP周期D3體
PCDHB11英文名稱:Monoacylglycerol Lipase緊密連接蛋白1體(C端)
PRX英文名稱:n-Myc轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 體
PRRSV-GP5英文名稱:MRP3核黃轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2體
PAK1英文名稱:MTERF1化鈣介質(zhì)體
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無放射性污染、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。