詳細介紹
原理是由一對引物介導,,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
??蒲蠵CR檢測試劑盒進口 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細胞、血液,、細菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加,。運用該技術可以對DNA,、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析,、基因表達差異分析,、基因分型。
主要技術:引物設計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
??蒲蠵CR檢測試劑盒進口 皺枝孢 Cladosporium delicatulum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
三葉豆紫檀苷(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標準品 Trifolirhizin
家貓肺成纖維樣細胞小鼠腫瘤細胞
桑皮苷A(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標準品 Mulberroside A
異常畢赤酵母 Pichia anomala球擬圓酵母 Torulopsis globosa
苑子苷A(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標準品 Complanatoside A
小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細胞(EGFP標記)大鼠成骨細胞*培養(yǎng)
桑色(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標準品 Morin
豇豆慢生根瘤 Bradyrhizobium vigna中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii
山梔苷酯(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標準品 Shanzhiside methylester
HLF-a(人肺細胞)MADB106(大鼠細胞)
商陸皂苷(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,,標準品 Esculentoside A
瑞士桿 Lactobacillus helveticus嗜熱鏈球 Streptococcus thermophilus
芍藥內(nèi)酯苷(標準品) 質(zhì)量HPLC≥96.50%,,標準品 Alibiflorin
刺孢吸水鏈 Streptomyces hygrospinosus佛羅里達側(cè)耳 Pleurotus florida
蛇床子(標準品) 質(zhì)量HPLC≥98%,標準品 OstholeORP8英文名稱:phospho-MEK5(Ser142)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白157體
OTUB1英文名稱:phospho-MEK5(Ser311+Thr315)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90B體
OPA1英文名稱:phospho-MEK5(Ser129)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A體
OAZ1英文名稱:phospho-MEK5(Ser137)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白104體
OR5T1英文名稱:MIG5卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12體
Oct-3/Oct-4英文名稱:MTLC卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67體
Oxytetracycline英文名稱:MAP4K5卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129體
ANKRD45英文名稱:MKLN1卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白107體
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中zui小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應,。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術概論。