詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
沙門(mén)氏菌和痢疾桿菌PCR聯(lián)合測(cè)定試劑盒 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào),;
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),,探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
沙門(mén)氏菌和痢疾桿菌PCR聯(lián)合測(cè)定試劑盒 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae芽孢桿屬 Bacillus sp.
英(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量供IR鑒別用 5,5-Diphenylhydantoin
裂鏈 Streptomyces rimosus苜蓿中華根瘤 Sinorhizobium meliloti
金剛(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量供檢查用 Adamantane
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae氈青 Penicillium velutinum
普羅帕 質(zhì)量>98%,BR Propafenone Hydrochloride
ACHN, 人腎細(xì)胞細(xì)胞Ponceau Stain Reagent/麗春紅染色試
普羅帕(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量供檢查用 Propafenone Hydrochloride
金子綠僵 Metarhizium anisopliae黑木耳 Auricularia auricula
呫噸(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量供檢查用 Xanthene-9-carboxylic acid
人肺上皮細(xì)胞中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株
呫噸(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量供HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查用 Xanthone
Raji,人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞小鼠腸巨噬細(xì)胞*培養(yǎng)
丁香(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量含量測(cè)定 Methyl eugenol
鼠李糖桿 Lactobacillus rhamnosus平菇 Pleurotus ostreatus
香葉(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量含量測(cè)定 Geraniol519-73-3化學(xué)試Human membrane IgA, mIgA Elisa Kit
593-49-7化學(xué)試Human membrane IgA, mIgA Elisa Kit
593-49-7化學(xué)試Human immunoglubin joining chain, Ig-j Elisa Kit
593-49-7化學(xué)試Human immunoglubin joining chain, Ig-j Elisa Kit
1609-47-8化學(xué)試Human β-subunits of hemoglobin, HB-β Elisa Kit
1609-47-8化學(xué)試Human β-subunits of hemoglobin, HB-β Elisa Kit
7612-98-8化學(xué)試Human secretory immunoglobulin A, SIgA Elisa Kit
7612-98-8化學(xué)試Human secretory immunoglobulin A, SIgA Elisa Kit
35245-26-2化學(xué)試Human activated coagulation factor Ⅻ, FⅫa Elisa Kit
35245-26-2化學(xué)試Human activated coagulation factor Ⅻ, FⅫa Elisa Kit
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染,、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。