詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
胎兒彎曲菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào),;
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取、cDNA合成,、qPCR
胎兒彎曲菌PCR檢測(cè)試劑盒 香菇 Lentinula edodes黑曲 Aspergillus niger
肽B;天蠶絲肽 質(zhì)量>95%,BR Cecropin B
人永生化角質(zhì)細(xì)胞大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum
卡律蝎 質(zhì)量>95%,BR Charybdotoxin
白地 Geotrichum candidum桿屬 Lactobacillus sp.
結(jié)晶 質(zhì)量>95%,BR Crystalline
人胰星狀細(xì)胞*培養(yǎng)RF/6A(猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞)
促皮質(zhì)釋放因子,,綿羊 質(zhì)量>95%,BR Corticotropin Releasing Factor,ovine
暗產(chǎn)色鏈 Streptomyces phaeochromogenes根瘤
Delta-催黑激 質(zhì)量>95%,BR Delta-MSH
FC33(人胚胎腎細(xì)胞(Asp-2因修飾))Tris-Glycine SDS
內(nèi)皮2,人,,犬 質(zhì)量>95%,BR Endothelin 2 (human, canine)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae球亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
內(nèi)皮3,,人,,大鼠 質(zhì)量>95%,BR Endothelin 3, human, rat
玫煙色擬青玉米孢
趨嗜曙紅細(xì)胞肽 質(zhì)量>95%,BR Eosinophilotactic Peptide7681-11-0化學(xué)試Human Proinsulin, PI Elisa Kit
7681-11-0化學(xué)試Human Proinsulin, PI Elisa Kit
7681-11-0化學(xué)試Human Insulin Receptor β, ISR-β Elisa Kit
921-53-9化學(xué)試Human Insulin Receptor β, ISR-β Elisa Kit
7778-80-5化學(xué)試Human Glycated hemoglobin A1c, GHbA1c Elisa Kit
333-20-0化學(xué)試Human Glycated hemoglobin A1c, GHbA1c Elisa Kit
41944-01-8化學(xué)試Human ghcagons-like pepfide 1, GLP-1 Elisa Kit
41944-01-8化學(xué)試Human ghcagons-like pepfide 1, GLP-1 Elisa Kit
7788-99-0化學(xué)試human thyroid stimulating immunoglobulin, TSI Elisa Kit
298-14-6化學(xué)試human thyroid stimulating immunoglobulin, TSI Elisa Kit
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無(wú)放射性污染,、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論。