詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細胞、血液,、細菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種、基因準確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中,。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒說明書 | 48T/盒 | 熒光-PCR法 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加,。運用該技術可以對DNA,、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析,、基因表達差異分析,、基因分型。
主要技術:引物設計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結合是關鍵,。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,,一般在2~4 小時完成擴增反應,。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術概論,。
分離:肽及球形蛋白質:3000~80000;葡聚糖(線性分子):1000~5000098%25gMVDV
分離:肽及球形蛋白質:3000~80000,;葡聚糖(線性分子):1000~5000098%500gBBWV
分離:肽及球形蛋白質:4000~150000;葡聚糖(線性分子):1000~10000098%100gmalonyl CoA
分離:肽及球形蛋白質:4000~150000,;葡聚糖(線性分子):1000~10000095%25gPARP
分離:肽及球形蛋白質:4000~150000,;葡聚糖(線性分子):1000~10000095%500gS6K
分離:肽及球形蛋白質:5000~400000;葡聚糖(線性分子):1000~15000098%100gSnRK1
分離:肽及球形蛋白質:5000~400000,;葡聚糖(線性分子):1000~15000098%25gSIRT6;SIR2L6CP,,98%99%100gTAL
CP,98%97%500gPGK
CP,,50-60%97%100mlCa
CP,,50-60%97%500mlCS
特純,93%,,粉末97%25gUrogen Ⅲ synthase
特純,,93%,粉末>97%(HPLC)5gACHDH
CP,,50-60%>97%(HPLC)500mlCHDH
布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒說明書原理是由一對引物介導,,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。