詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中,。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
牛副結(jié)核分歧桿菌(MPB)核酸檢測試劑盒進(jìn)口 | 48T/盒 | 熒光-PCR法 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論,。
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1000~5000;葡聚糖(線性分子):100~500097%100gD-AA
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1000~5000,;葡聚糖(線性分子):100~500097%25gQUIN
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1000~5000,;葡聚糖(線性分子):100~5000≥96%500gPTP
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1500~30000;葡聚糖(線性分子):500~10000>95.0%(T)100gTyk
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1500~30000,;葡聚糖(線性分子):500~10000>95.0%(T)25gTyk
分離:肽及球形蛋白質(zhì):1500~30000,;葡聚糖(線性分子):500~1000098%500gSPA2
分離:肽及球形蛋白質(zhì):3000~80000;葡聚糖(線性分子):1000~5000098%100gSMV高純,,99%98%500gSLRSV
BR,,98%98%100gToRSV
BR,98%98%25gTRSV
BR,,98%98%500gMV
BR,,98%97%100gIMP
BR,98%97%25gP-Selectin
BR,,98%99%500gSkDH
牛副結(jié)核分歧桿菌(MPB)核酸檢測試劑盒進(jìn)口原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),,能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。