詳細(xì)介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)核酸檢測試劑盒說明書 | 48T/盒 | 熒光-PCR法 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板,??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細(xì)胞,、活PCR技術(shù)概論,。
BR98%1gV-H+-ATPase
BR98%250mgV-H+-PPase
BR98%1gPM-H+-ATPase
BR≥98%250mgV-H+-ATPase
BR≥98%1gV-H+-PPase
BR98%250mgnsLTP
BR,牛頜下98%100mgCasp-3AR,,99%99%500gHPR
AR,,99%99%100gprotein
AR,99%98%500gVB
BR,,95%98%100mgR-Hya
BR,,95%98%10mgcytb561
BR,,95%98%500mgIDO1
高純,98%98%1gIDO1
豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)核酸檢測試劑盒說明書原理是由一對引物介導(dǎo),,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能,。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。