人原代角膜成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代角膜成纖維細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含人原代角膜成纖維細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分，可直接用人原代角膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng),。

產(chǎn)品主要成分：

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光,，保存2個月,；-20℃，避光,，保存6個月,。

1）復(fù)蘇人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。      

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識,。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基時應(yīng)注意無菌操作,，避免污染,。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,，可以直接使用,。

3.為保持本人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。

4.所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用,，超出保質(zhì)期，必須放棄使用,。

5.本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用,，不可應(yīng)用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后,，可能會有少量絮狀物析出,，不影響人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基正常使用,。