人原代軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代軟骨細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含人原代軟骨細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分，可直接用于人原代軟骨細(xì)胞的培養(yǎng),。

產(chǎn)品主要成分：

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃,，避光，保存2個(gè)月,；-20℃,，避光，保存6個(gè)月,。

1）復(fù)蘇人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意無菌操作,，避免污染,。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,，可以直接使用,。

3.為保持本人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時(shí)間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。

4.所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用,，超出保質(zhì)期，必須放棄使用,。

5.本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用,，不可應(yīng)用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后,，可能會(huì)有少量絮狀物析出,，不影響人原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基正常使用。