詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
品牌 貼壁生長
特征特性 LLC-MK2細(xì)胞株源自六只成年綠猴的腎細(xì)胞懸液,。 據(jù)報道這個細(xì)胞對很多病毒敏感,,包括腸道病毒、鼻病毒,、粘病毒和痘病毒家族中的成員。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%
傳代方法 消化3-5分鐘,。1:
2。3天內(nèi)可長滿,。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
恒河猴腎細(xì)胞,;LLC-MK2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn),。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-factor VIII/FITC 熒光素標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C16orf7/ATP-BL 16號染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格 0.2ml
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-過氧化酶活化增生受體(多肽) 0.5mg
HDC 英文名稱: L-組酸脫羧酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RNF8 環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Insulin Receptor(ISR) 胰島素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PALB2 癌易感基因相關(guān)蛋白2 規(guī)格 0.1ml
CEACAM5 Kit Human 人 CEACAM5 / CD66e ELISA配對抗體 ELISA
TEF3 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 0.2ml
CPA6 英文名稱: 胰羧肽酶A6抗體 0.2ml
Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
FAF1 英文名稱: Fas相關(guān)1因子抗體 0.1ml
表皮生長因子受體抗體 Anti-EGF-R 0.1ml
anti-PDI/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin/FITC 熒光素標(biāo)記親合素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
IGFBP-2 ELISA Kit 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Protein C/FITC 熒光素標(biāo)記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM76B FAM76B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生長因子 96T
Phospho-MEK1 + MEK2 (Ser222) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體 0.1ml
ACSL1 英文名稱: 長鏈脂肪酸輔酶A連接酶1/2抗體 0.2ml
Anti-Protein C/FITC 熒光素標(biāo)記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。