詳細介紹
細胞名稱 家兔腎細胞;RABK3培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一雌性家兔的腎組織,。2006年由中國科學院昆明細胞庫建立,。
培養(yǎng)條件 M-199:
with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
家兔腎細胞,;RABK3培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗,。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-FGF1/FITC 熒光素標記酸性成纖維細胞生長因子Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C11orf71 11號染色體開放閱讀框71抗體 規(guī)格 0.2ml
NT5C2 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ 0.5mg
HADHSC(mouse, rat) 英文名稱: 短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體(小鼠,,大鼠) 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF185 環(huán)指蛋白185抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細胞蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
leptin 大鼠瘦素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-E.coli O6 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MUM1/FLJ14868 突變的黑色素瘤相關抗原1抗體 規(guī)格 0.2ml
MAC(Human membrane attack complex) ELISA Kit 人膜攻擊復合物 96T
phospho-SAPK3 (Thr183+Tyr185) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶磷酸酶p38γ抗體 0.2ml
CHRNA6 英文名稱: 型乙酰膽堿受體α6/AChRα6抗體 0.2ml
Anti-E.coli O6 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-Mouse IgA whole serum 兔抗小鼠IgA抗血清 1ml
LRRC2 英文名稱: LRRC2蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh DHRS4L2 短鏈脫氫酶/還原酶家族4樣2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Ang- I (Mouse angiotension I ) ELISA Kit 小鼠血管緊張素ⅠMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
鏈霉素檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜/奶
Anti-C-Myc/MYC/MTLC /FITC 熒光素標記C-Myc致癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Cytochrome P450 2D6/CYP2D6 /FITC 熒光素標記細胞色素P450 2D6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Lp-PLA2/FITC 熒光素標記抗脂蛋白磷脂酶A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CARD6 凋亡加強結構域蛋白6抗體 規(guī)格 0.2ml
DP-I/DSP(desmoplakin I ) 橋粒斑蛋白1抗原 0.5mg
HEXIM2 英文名稱: HEXIM2蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Shh Shh信號轉導通路膜蛋白受體抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Lp-PLA2/FITC 熒光素標記抗脂蛋白磷脂酶A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。