詳細(xì)介紹
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞,;RBL-1價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造,。
細(xì)胞名稱 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1價(jià)格
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 RBL-1細(xì)胞由H Metzger和C Isersky由一名白血病患者的外周血中分離并建立,,細(xì)胞表現(xiàn)出嗜堿性粒多種細(xì)胞特性,,例如細(xì)胞表面帶有IgE受體.但在IgE介導(dǎo)的反應(yīng)中,該細(xì)胞并不釋放組織胺,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),,晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化,、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值,。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-GRO Beta/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-P53 (Ser37) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Bestrophin 4 卵黃狀黃斑病蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) 雙鏈RNA腺苷酸脫基酶抗原 0.5mg
GSK3 Alpha + Beta 英文名稱: 糖原合酶激酶3α+β抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ran/ARA24 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-phospho-P53 (Ser37) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lptn/LTN/XCL1(Mouse lymphotactin) ELISA Kit 小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-C/EBP Beta/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Goat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
Mouse mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit 小鼠粘蛋白/粘液素5B 96T
LEO1 英文名稱: RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體 0.1ml
APOC3 英文名稱: 載脂蛋白C3抗體 0.2ml
Anti-C/EBP Beta/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
GPR115 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體115抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANTXR2 炭疽毒素受體2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-20R Alpha/IL20RA/FITC 熒光素標(biāo)記白介素20受體α鏈抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-RasGRF1 (Ser916)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化Ras特異性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸釋放因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PENK/Enkephalin A/FITC 熒光素標(biāo)記腦啡肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
雌激素受體α抗體 Anti-ER-α 0.1ml
Donkey Anti-Goat IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
FBXO28 英文名稱: FBXO28蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser262) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-human IgG/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml