詳細(xì)介紹
大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞,;IEC-6價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造,。
細(xì)胞名稱 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞;IEC-6價(jià)格
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 皮質(zhì)醇可抑制該細(xì)胞的生長(zhǎng),。該細(xì)胞表達(dá)腸上皮*抗原,,在20代以前保持恒定的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞形態(tài),此后生長(zhǎng)速度迅速下降,,細(xì)胞形態(tài)也發(fā)生改變,。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 5%FBS,;0.01mg/ml Insulin
傳代方法 1:3~1:6傳代;每周換液2次,。
傳代情況 P24
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支?
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),,晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn),。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率,。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-Histone H1/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白H1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-ATF2(pSer490/pSer498)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化活化復(fù)制因子2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATR/ACTR/RAC3 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體 規(guī)格 0.1ml
VIP (Vasoactive Intestinal peptide) 血管活性腸肽 0.5mg
GRAP2 英文名稱: 生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.3ml
Anti-phospho-ATF2(pSer490/pSer498)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化活化復(fù)制因子2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
M-AChR ELISA Kit 大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-T4 甲狀腺素T4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Glypican 5 磷脂?;嫉鞍拙厶?5抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta-EP(mouse Beta-Endorphin) ELISA Kit 小鼠β內(nèi)啡肽 96T
NOSTRIN 英文名稱: 一氧化氮合酶轉(zhuǎn)運(yùn)誘導(dǎo)抗體 0.1ml
Angiotensin I 英文名稱: 血管緊張素I抗體 0.2ml
Anti-T4 甲狀腺素T4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
GPRIN1 英文名稱: G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Apelin/Apelin 13 脂肪炎癥因子Apelin抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IL-17/PE 熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Raptor /FITC 熒光素標(biāo)記mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PPAR Gamma /FITC 熒光素標(biāo)記過(guò)氧化酶活化增生受體γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM Whole serum 兔抗IgM抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
兔抗非洲爪蟾IGC抗體 Anti-IGC 1ml
Dog IgM 兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FUT11 英文名稱: 巖藻糖轉(zhuǎn)移酶11抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM Whole serum 兔抗IgM抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml