詳細(xì)介紹
人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生長因子懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。
產(chǎn)品名稱:人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生長因子
規(guī)格:1ml(500X)
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C25
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn),。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化,、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計(jì)算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值,。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-KiSS-1R/GPR54/GPCR54/FITC 熒光素標(biāo)記G蛋白偶聯(lián)受體54抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-SIP1 /FITC 熒光素標(biāo)記運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALS2CR4 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 100ug
GPR89A 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPR89A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-SIP1 /FITC 熒光素標(biāo)記運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MBP ELISA Kit 大鼠髓磷脂堿性蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh FRMD2/FRMPD1 FRMD2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
IL-12/P70(Human Interleukin 12) ELISA KIT 人白介素12 96T
NF-H 英文名稱: 高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 0.1ml
AJAP1 英文名稱: 粘合連接相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
Anti-Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml
GPR113 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPR113蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APOC2 載脂蛋白C2抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IL-6(Human)/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記白介素6(人)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG whole serum 兔抗長爪沙鼠IgG抗血清 規(guī)格 1ml
Anti-PSCA /FITC 熒光素標(biāo)記抗前列腺干細(xì)胞抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
HL ELISA Kit 大鼠肝脂酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD99/E2 antigen CD99抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GlyR alpha 1/2/3 甘氨酸受體alpha 1/2/3型抗體 規(guī)格 0.1ml
DKK1(Human Dickkopf 1) ELISA Kit 人Dickkopf 1 96T
NFIL3 英文名稱: 人白介素3介導(dǎo)核因子抗體 0.2ml
Arfaptin 2 英文名稱: ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
Anti-CD99/E2 antigen CD99抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml