詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株,;CD98-2C8培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
雜交瘤細(xì)胞株,;CD98-2C8培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮,、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-HA tag/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記HA tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PCNA/FITC 熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Bax Bax 規(guī)格 0.1ml
5-LOX (5-lipoxygenase) 5-脂氧合酶抗原 0.5mg
GPBB 英文名稱: 腦糖原磷酸化酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgM 兔抗大鼠IgM 規(guī)格 1mg
Anti-PCNA/FITC 熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MIS/AMH(Human Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone) ELISA Kit 人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Podoplanin/gp36 平足蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HER2 receptor HER2受體抗體 規(guī)格 0.1ml
MTL ELISA Kit 大鼠胃動素 96T
PHOX2A 英文名稱: 先天性眼外肌纖維化相關(guān)蛋白FEOM2抗體 0.2ml
C9orf78 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框78抗體 0.2ml
Anti-Podoplanin/gp36 平足蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
RNF142 英文名稱: 環(huán)指蛋白142抗體 0.2ml
protein 4.2 英文名稱: 紅細(xì)胞膜蛋白4.2抗體 0.2ml
軸索過度生長抑制因子-A抗體 Anti-Nogo-A 0.1ml
Anti-SIRT1/FITC 熒光素標(biāo)記沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-P53(Thr55) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml
Bassoon(BSN) Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
F XII a(Human activated coagulation factor XII ) ELISA Kit 人活化凝血因子ⅫMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh H5N1-H5 H5亞型全病毒抗體 規(guī)格 0.1ml
CTX- I (Human C-opeptide of type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型膠原C端肽 96T
PILR beta 英文名稱: 細(xì)胞表面受體PILRβ抗體 0.2ml
BRP44 英文名稱: 腦蛋白44抗體 0.2ml
Anti-RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。