詳細介紹
細胞名稱 雜交瘤細胞株;1-5-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
雜交瘤細胞株,;1-5-2培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-JAK1/FITC 熒光素標記蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-SHC (Tyr317)/FITC 熒光素標記磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Amphetamine(2A3F6) 單克隆抗體() 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
GOLGA3 英文名稱: 高爾基體膜相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-horse IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗馬IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-SHC (Tyr317)/FITC 熒光素標記磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MMP-3 (Rabbit matrix metalloproteinase 3) ELISA Kit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-Phospho-Dab1 (Tyr232) /FITC 熒光素標記兔抗人,、大、小鼠磷酸化Disabled 1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cystatin A 胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制劑A抗體 規(guī)格 0.2ml
dog IgM (親和純化) 狗IgM 1mg
LEU5 英文名稱: 白血病相關(guān)蛋白5抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ZEB1/AREB6 負調(diào)控因子白細胞介素2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-Dab1 (Tyr232) /FITC 熒光素標記兔抗人,、大,、小鼠磷酸化Disabled 1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
S100 Protein 1:300 濃縮液 0.1ml 進口分裝
UBE2E3 英文名稱: 泛素蛋白連接酶E3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體 規(guī)格 0.1ml
PAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DHPS 英文名稱: 脫氧輔合酶蛋白抗體 0.2ml
Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-HDAC8 /FITC 熒光素標記組蛋白去乙酰化酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-pEGFR(pTyr1068)/FITC 熒光素標記抗磷酸化表皮生長因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BAAT1/C7orf27 7號染色體開放閱讀框27抗體 規(guī)格 0.2ml
CSF3/G-CSF peptide 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3抗原 0.5mg
GFAP delta 英文名稱: 膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAPδ抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗豬IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-pEGFR(pTyr1068)/FITC 熒光素標記抗磷酸化表皮生長因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。