詳細(xì)介紹
雜交瘤細(xì)胞株,;4F2價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株,;4F2價格
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Histone H1b/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白H1b抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATP7A 銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)α鏈抗體 規(guī)格 0.1ml
BSA(標(biāo)準(zhǔn)) 血清白蛋白(標(biāo)準(zhǔn)) 1mg
GMPR2 英文名稱: 鳥苷酸還原酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
mouse Caspase-6 小鼠Caspase-6Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-FLT-3/CD135 FMS樣酪氨酸激酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml
Beta-Nph(Human Beta-naphthol) ELISA Kit 人β酚 96T
phospho-Smad3 (Ser423) 英文名稱: 磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml
Complement fragment 3c 英文名稱: 補體片段C3c抗體 0.2ml
Anti-FLT-3/CD135 FMS樣酪氨酸激酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SAMD14 英文名稱: SAMD14抗體 0.2ml
ENPP1 英文名稱: 核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體 0.2ml
細(xì)胞表面趨化因子受體2A抗體 Anti-CCR-2A 0.1ml
Anti-USP1/FITC 熒光素標(biāo)記泛素特異性蛋白酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HER3 (Tyr1222) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格 0.1ml
CD2AP (CD2-associated protein) 白細(xì)胞分化抗原CD2APMulti-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Human leucocyte antigen B27,HLA-B27 ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原B27Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-RIP2 受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GTPBP10/Claudin12 緊密連接蛋白12抗體 規(guī)格 0.2ml
Cpn-Ab(Human Chlamydia pneumoniae antibody) ELISA Kit 人肺炎衣原體抗體 96T
mu Opioid receptor 英文名稱: μ-型受體抗體 0.1ml
PNK1 英文名稱: 多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體 0.2ml
Anti-RIP2 受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml