詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞株,;SZCIQASFV1培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
小鼠雜交瘤細(xì)胞株;SZCIQASFV1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。
Anti-HNF-1 Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記肝細(xì)胞核因子1α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser289) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATF3 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy7 Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
GLUT5 英文名稱: 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格 0.5ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser289) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MPO-ANCA IgG(Human Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG) ELISA kit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh LIX1 LIX1抗體 規(guī)格 0.2ml
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit 人金屬硫蛋白2 96T
REEP5 英文名稱: 受體表達(dá)蛋白5/息肉相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
C12ORF54 英文名稱: 12號染色體開放閱讀框54抗體 0.2ml
Anti-Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
sCKR(Human soluble cytokine receptor) ELISA Kit 人可溶性細(xì)胞因子受體 96T
MSK1 英文名稱: 有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ET-1(2C4) 內(nèi)皮素-1單克隆抗體 規(guī)格 0.2ml
IGF-1 ELISA Kit 大鼠胰島素樣生長因子1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Annexin A2 英文名稱: 膜粘連蛋白 Ⅱ抗體 0.1ml
Anti-BAFFR/Tnfrsf13c/CD268/FITC 熒光素標(biāo)記B細(xì)胞活化因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Deltex-1/FITC 熒光素標(biāo)記Deltex-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cadherin like 23 鈣粘蛋白23抗體 規(guī)格 0.2ml
Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽) 0.5mg
phospho-HSP70(Tyr41) 英文名稱: 磷酸化熱休克蛋白70抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh SEPT14 細(xì)胞分化蛋白SEPT14抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml