詳細介紹
細胞名稱 雜交瘤細胞,;20-G8培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
雜交瘤細胞;20-G8培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。
Anti-Histone H3-like protein/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白H3樣抗體(N端抗體)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-JNK1/2/3/FITC 熒光素標(biāo)記抗氨基末端激酶1/2/3抗體 IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATP2c1 鈣離子ATP酶通道蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
PACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38(全蛋白) 0.5mg
GDF3 英文名稱: 生長分化因子3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.5ml
Anti-JNK1/2/3/FITC 熒光素標(biāo)記抗氨基末端激酶1/2/3抗體 IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NTX)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原N末端肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TRAF1 壞死因子受體相關(guān)因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh GLCCI1 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
ICA(Mouse islet cell antibody) ELISA KIT 小鼠胰島細胞抗體 96T
NUSAP1 英文名稱: 核仁和紡錘體相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Ankyrin B 英文名稱: 錨定蛋白B抗體 0.2ml
Anti-TRAF1 壞死因子受體相關(guān)因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
SK(Human Streptokinase) ELISA Kit 人鏈激酶 96T
Rab24 英文名稱: ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Melamine 三聚氰胺抗體 規(guī)格 0.2ml
ASGPR(Human asialoglyco protein receptor) ELISA Kit 人去唾液酸糖蛋白受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C1orf54 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框54抗體 0.2ml
Anti-HDAC4 組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
cyclin D1 周期素D1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-phospho-CBL2(Tyr731) 磷酸化原癌蛋白CBL2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCDHB5 原鈣粘蛋白β5抗體 規(guī)格 0.2ml
CD97 Kit Human 人 CD97 ELISA配對抗體 ELISA
TNRC6B 英文名稱: 三核苷酸重復(fù)蛋白6B抗體 0.2ml
COPS2 英文名稱: 甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體 0.2ml
Anti-phospho-CBL2(Tyr731) 磷酸化原癌蛋白CBL2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml