詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞;rBinlb10A5培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
雜交瘤細(xì)胞,;rBinlb10A5培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化,、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值,。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),,晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-IGF-II/FITC 熒光素標(biāo)記胰島素樣生長因子-II抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Plexin A2/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ARMCX1 ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體 規(guī)格 0.2ml
Donkey Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的驢抗人IgG 0.1ml
GCP4 英文名稱: γ-微管蛋白GCP4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgG 兔抗猴IgG 規(guī)格 1mg
Anti-Plexin A2/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)叢蛋白A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ODC(Ornithine decarboxylase) 鳥氨酸脫羧酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-COX7A2 細(xì)胞色素c氧化酶COX7A2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ASK1(Thr845) 磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
Vhl 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
Unrip 英文名稱: 絲酸/蘇酸激酶受體相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
DLL3 英文名稱: Notch信號(hào)通路Delta樣配體3抗體 0.2ml
Anti-COX7A2 細(xì)胞色素c氧化酶COX7A2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SLC/CCL21(Human secondary lymphoid-tissue chemokine) ELISA Kit 人二級(jí)淋巴組織趨化因子 96T
NF1 英文名稱: 1型神經(jīng)纖維瘤抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh GAS7/Growth Arrest Specific Protein 7 生長休止特定蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit 大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/MMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
APOE3 英文名稱: 載脂蛋白E3抗體 0.2ml
Anti-VAT 囊泡乙酰膽堿通道抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-EPEC-O6/Gold 膠體金離子標(biāo)記大腸埃希桿菌O6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Menin/Men1/FITC 熒光素標(biāo)記Menin抑癌蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C6orf62 6號(hào)染色體開放閱讀框62抗體 規(guī)格 0.2ml
CD80/B7-1(human) 人刺激分子B7-1蛋白抗原 0.5mg
S100A18 英文名稱: 角化蛋白S100A18抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SCP2/NLTP 固醇攜帶蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Menin/Men1/FITC 熒光素標(biāo)記Menin抑癌蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml