詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞;BDRXN-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
小鼠雜交瘤細(xì)胞,;BDRXN-2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-IL-18R Beta/IL1R7/CD218b/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-18受體β鏈抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-RASSF1A/FITC 熒光素標(biāo)記Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AP2 gamma 轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
GBA 英文名稱: β-葡萄糖腦苷脂酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/APC APC標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-RASSF1A/FITC 熒光素標(biāo)記Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Osteocalcin 小鼠骨鈣素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Apo B 載脂蛋白B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
APCR(Human activated protein C resistance) ELISA Kit 人活化蛋白C抵抗素 96T
SLAP 英文名稱: SLAP蛋白抗體 0.1ml
C6orf192 英文名稱: 8號染色體開放閱讀框192抗體 0.2ml
Anti-Apo B 載脂蛋白B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
SLPI(Human secretory leukocyte protease inhibitor) ELISA Kit 人分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制因子 96T
SNX10 英文名稱: 分選連接蛋白10抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 2ml
NT-3 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素-3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CCDC124 英文名稱: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體 0.2ml
Anti-FGFBP 纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-Afadin(Ser1718) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大,、小鼠磷酸化絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CPXM2 羧肽酶X(M14家族2)抗體 規(guī)格 0.2ml
CD36L1/SRB1 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原 0.5mg
kir 6.1 英文名稱: ATP敏感鉀離子通道蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh UCP-1 線粒體脫偶連蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化細(xì)胞核受體Rev-Erbα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。