詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞;3C8培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
小鼠雜交瘤細(xì)胞,;3C8培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),,按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Integrin alpha 1/CD49a/FITC 熒光素標(biāo)記整合素α1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-RXR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記核受體RXRα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD42 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
ganglioside GM1 英文名稱: 神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/PE PE標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml
Anti-RXR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記核受體RXRα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) p27(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh P45017A1/Cytochrome P450 17A1 細(xì)胞色素C P450 17A1抗體 規(guī)格 0.1ml
CR2 Kit Human 人 CD21 ELISA配對抗體 ELISA
TBL1Y 英文名稱: 轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體 0.2ml
C6orf64 英文名稱: 6號染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml
Anti-Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
SMM(Human smooth muscle Myosin) ELISA Kit 人平滑肌肌球蛋白 96T
RBFA 英文名稱: 核糖體結(jié)合因子RBFA抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Goat IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
SCFR(Human Stem Cell Factor Receptor) ELISA kit 人干細(xì)胞因子受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
phospho-CHEK1 (Ser345) 英文名稱: 磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶1抗體 0.1ml
Anti-GLP-2 胰高血糖素樣肽-2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lpin1 protein Lpin1 protein(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-SLAMF9/CD2F-10 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAI1/PLANH1/Serpine 1 內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
CD200R1 Kit Cynomolgus 食蟹猴 CD200R ELISA配對抗體 ELISA
Thioredoxin 英文名稱: 硫氧還蛋白抗體 0.1ml
C6orf174 英文名稱: 6號染色體開放閱讀框174抗體 0.2ml
Anti-SLAMF9/CD2F-10 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml