詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞,;HBRP3-17培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
小鼠雜交瘤細(xì)胞;HBRP3-17培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-HA tag/FITC 熒光素標(biāo)記HA tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PCNA/FITC 熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Bax Bax抗體 規(guī)格 0.1ml
ADAMTS7 peptide/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗原 1mg
GABR B3 英文名稱: G基丁酸受體3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-Rat IgM whole serum 兔抗大鼠IgM抗血清 規(guī)格 1ml
Anti-PCNA/FITC 熒光素標(biāo)記增殖細(xì)胞核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PBP/CXCL7(Human plaet basic protein) ELISA Kit 人血小板堿性蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PS-1 早老素蛋白-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HCV-NS1 丙型肝炎病毒-NS1抗體 規(guī)格 0.1ml
PL-A2 ELISA Kit 大鼠磷脂酶A2 96T
Phospho-PPAR Gamma (ser112) 英文名稱: 磷酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 0.1ml
BRD2 英文名稱: BRD2蛋白抗體 0.2ml
Anti-PS-1 早老素蛋白-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Sox3 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子Sox3抗體 0.2ml
ERK1 + ERK2 英文名稱: 原活化蛋白激酶1/2抗體 0.1ml
丙酮酸脫氫酶激酶4抗體 Anti-Pdk4 0.1ml
Anti-AKAP12/FITC 熒光素標(biāo)記絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NDEL1(Ser231) 磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規(guī)格 0.1ml
GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ELK1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-MMP-11/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-11抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C2CD2/C21orf25 21號染色體開放閱讀框25抗體 規(guī)格 0.2ml
CC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細(xì)胞蛋白(Clara細(xì)胞分泌蛋白)抗原 0.5mg
HOXD13 英文名稱: 同源盒蛋白D13抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Salmonella enteritidis H 傷寒沙門氏菌鞭毛抗原H抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MMP-11/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-11抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml