詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;BSA培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗,,可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠雜交瘤細胞;BSA培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-PTP-1B/FITC 熒光素標記PTP-1B蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Recomb Protein G/FITC 熒光素(FITC)標記重組蛋白-GMulti-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
粘附分子整合素β1抗體 Anti-ITG-β1/CD29 0.1ml
SOX10 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體 0.2ml
FRAS1 英文名稱: 細胞外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PPM1A(Ser375) 磷酸化蛋白磷酸酶2C亞型α抗體 規(guī)格 0.1ml
Recomb Protein G/FITC 熒光素(FITC)標記重組蛋白-GMulti-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
phospho-heterochromatin protein 1 (pTyr41)peptide 異染色質(zhì)蛋白1(磷酸化多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ABCD1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 規(guī)格 0.1ml
兔抗猴IgG血清 0.5ml 國產(chǎn)
WNT5A 英文名稱: 信號通路Wnt5a抗體 0.1ml
Phospho-DBC1 (Tyr454) 英文名稱: 磷酸化膀胱癌缺失基因1抗體 0.1ml
Anti-ABCD1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
STAM 英文名稱: 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接蛋白1抗體 0.2ml
E2F4 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體 0.1ml
轉(zhuǎn)移生長因子–β2抗體 Anti-TGF-β2 0.1ml
Anti-TLR6/CD286/FITC 熒光素標記Toll樣受體6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-LATS1+LATS2 (Thr1079 +Thr1041) 磷酸化抑制基因LATS1/LATS2抗體 規(guī)格 0.1ml
CD73 (5′-nucleotidase cytosolic II ) 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ 抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit 人β干擾素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-FPRL1 脂氧素受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit 人CCAAT增強子結(jié)合蛋白ε 96T
SOX21 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子21抗體 0.2ml
CLDND2 英文名稱: 膜蛋白CLDND2抗體 0.2ml
Anti-FPRL1 脂氧素受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。