詳細介紹
細胞名稱 小鼠腎腺癌細胞;RAG培養(yǎng)
形態(tài)特性 變形蟲樣
品牌 貼壁生長
特征特性 這是一株腎臟-2α細胞株的非回復8-氮雜鳥嘌呤抗性(HPRT-, HGPRT-)克隆,。 測試發(fā)現(xiàn)缺肢畸形病毒(鼠痘)陰性,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘,。1:
2,。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(264+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工
小鼠腎腺癌細胞,;RAG培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-p63 (Ser395) /FITC 熒光素標記磷酸化P63抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG/Biotin 生物素化兔抗馬IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
心肌肌鈣蛋白抗體 anti-CTn1 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的羊抗小鼠IgM 0.1ml
FLT3L 英文名稱: FMS樣酪酸激酶3配體抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-YAP1(Ser127) 磷酸化原癌基因Yes相關蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/Biotin 生物素化兔抗馬IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Plant zeatin riboside,ZR ELISA Kit 植物玉米索核苷Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DDX4/MVH/FITC 熒光素標記DDX4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cyclophilin D 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)40抗體 規(guī)格 0.2ml
human IgA/FITC 熒光素標記人IgA 0.3ml
LAP3 英文名稱: 亮酸基肽酶3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh WRCH-1 WRCH1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-DDX4/MVH/FITC 熒光素標記DDX4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SULT1B1 Kit Human 人 SULT1B1 ELISA配對抗體 ELISA
TXNDC11 英文名稱: 硫氧還蛋白11抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh P95/NBS1 DNA修復蛋白NBS1抗體 規(guī)格 0.2ml
MSLN(mesothelin) 間皮素(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
C8orf4 英文名稱: 8號染色體開放閱讀框4抗體 0.2ml
Anti-CD36/PAS-4 CD36抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
ISR- Beta ELISA Kit 大鼠胰島素受體βMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AAK1/FITC 熒光素標記AP2關聯(lián)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病毒 規(guī)格 0.2ml
BMPs(Mouse bone morphogenetic proteins) ELISA Kit 小鼠骨形成蛋白 96T
11-Mar 英文名稱: 膜相關環(huán)指蛋白11抗體 0.2ml
ALK 英文名稱: 間變型淋巴瘤激酶抗體 0.2ml
Anti-AAK1/FITC 熒光素標記AP2關聯(lián)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。