詳細介紹
細胞名稱 小鼠抗人IgE雜交瘤細胞,;mAbhIgE-511培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 保持細胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠抗人IgE雜交瘤細胞,;mAbhIgE-511培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,,(根據經驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗,。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造,。
Anti-RACK1/FITC 熒光素標記受體激活蛋白激酶C1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-mouse IgM/FITC 熒光素標記羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
多巴胺β羥化酶抗體 Anti-DBH 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗人IgG 0.1ml
FDFT1 英文名稱: 法尼基二磷酸法尼基轉移酶1/鯊烯合成酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-mouse IgM/FITC 熒光素標記羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
PY(Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit 小鼠吡啶交聯物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD44/PE 熒光素PE標記CD44抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DR6/CD358 細胞調亡素/壞死因子受體死亡受體6抗體 規(guī)格 0.2ml
HSV- I IgM 單純皰疹Ⅰ型病毒 IgM(捕獲法一步法)
MTHFR 英文名稱: 亞甲基四氫葉酸還原酶MTHFR抗體 0.1ml
ARH 英文名稱: 低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體 0.2ml
Anti-CD44/PE 熒光素PE標記CD44抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TERT 端粒酶逆轉錄酶 0.5mg
KSR1 英文名稱: Ras信號轉導KSR1蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh CXCR2/CD182 細胞表面趨化因子受體2抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-BNP/Biotin 生物素化腦鈉肽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh WBSCR14/ChREBP 糖類應答元件結合蛋白ChREBP抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-DR4/APO2/TRAILR1 /FITC 熒光素標記死亡受體4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HADHSC (rat, mouse)/FITC 熒光素標記短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體(大鼠,,小鼠)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766) /FITC 熒光素標記磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh COX4NB COX4NB蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta Amyloid 29-42 β淀粉樣肽29-42(野生型) 0.1mg
phospho-KCNJ1(Ser44) 英文名稱: 磷酸化細胞內流鉀通道蛋白KCNJ1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh UBE2C 泛素蛋白連接酶C抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766) /FITC 熒光素標記磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml