詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎細(xì)胞;SC-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清,,10%
傳代方法 1:2-1:6
傳代情況 P74
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠胚胎細(xì)胞,;SC-1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進(jìn)行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細(xì)胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-R-cadherin /FITC 熒光素標(biāo)記R-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-goat IgM/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
DTX1抗體 Anti-Deltex-1 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1ml
FGFR1OP2 英文名稱: FGFR1癌基因伴侶蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-TrkA (Tyr785)/TrkB (Tyr816) 磷酸化酪氨酸激酶A抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-goat IgM/FITC 熒光素標(biāo)記小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
PROGR ELISA kit 大鼠孕酮受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Synapsin II 神經(jīng)突觸素2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
SP(Mouse Substance P) ELISA Kit 小鼠P物質(zhì) 96T
NEDD4 英文名稱: 神經(jīng)前體細(xì)胞發(fā)育下調(diào)蛋白4抗體 0.2ml
Beta tubulin cofactor D 英文名稱: 微管蛋白β輔助因子D抗體 0.2ml
Anti-Synapsin II 神經(jīng)突觸素2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
T4-BSA 甲狀腺素T4偶聯(lián)血清白蛋白 1mg
KLF1, 2, 4 英文名稱: 上皮鋅指蛋白1, 2, 4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh CXCR1/IL-8RA 細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-HSP27 (Ser78)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh WASF2 WASF2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-DRADA/ADAR1/FITC 熒光素標(biāo)記雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
pFN(Human Plasma fibronectin) ELISA kit 人血漿纖維連接蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Profilin 1 前纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HDHD3 HDHD3蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta-Nph(Mouse Beta-naphthol) ELISA Kit 小鼠β酚 96T
p53 apoptosis effector related to PMP22 英文名稱: p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體 0.1ml
phospho-c-Kit(Tyr823) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-kit抗體 0.1ml
Anti-Profilin 1 前纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。