詳細介紹
細胞名稱 小鼠誘導性多潛能干細胞,;PUMC-mips-A5培養(yǎng)
形態(tài)特性 克隆樣
品牌 貼壁生長
特征特性 裸鼠移植實驗證明可向三個胚層分化。
培養(yǎng)條件 KO-DMEM + 15% FBS + 103U/ml LIF + 2mM L-Glu + 1% NEAA + 0.1M β-Mer
傳代方法 1:
10傳代,;3~4天傳代一次
傳代情況
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠誘導性多潛能干細胞,;PUMC-mips-A5培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)/FITC 熒光素標記磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-chi IgM/FITC 熒光素標記兔抗雞IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
轉錄因子E2F-1抗體 Anti-E2F1 0.1ml
Goat Anti-human IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG 0.1ml
FBXL16 英文名稱: FBXL16蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TNIK(Ser764) 磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-chi IgM/FITC 熒光素標記兔抗雞IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
RBP-4 ELISA Kit 大鼠視黃醇結合蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TNFSF14 壞死因子配體超家族成員14抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GLT8D2 糖基轉移酶GLT8D2抗體 規(guī)格 0.2ml
CK-13(Human cytokeratin 13) ELISA Kit 人細胞角蛋白13 96T
NS5ATP9 英文名稱: 丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體 0.2ml
AAK1 英文名稱: AP2關聯(lián)激酶1抗體 0.2ml
Anti-TNFSF14 壞死因子配體超家族成員14抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
THAA(Human thyroid hormone autoantibodies) ELISA Kit 人甲狀腺非肽激素抗體 96T
PLTP 英文名稱: 磷脂轉移蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh HIST1H2AH 組蛋白H2A/S抗體 規(guī)格 0.2ml
ATM(Human Ataxia angiectasia mutated) ELISA Kit 人毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變基因Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CHRDL2 英文名稱: 新因子1抗體 0.1ml
Anti-PIBF 孕激素誘導阻斷因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit 小鼠可溶性CD30Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標記兔抗人,、大,、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Ensconsin 上皮細胞微管相關蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml
BALP ELISA Kit 大鼠骨堿性磷酸酶 96T
MCM5 英文名稱: 染色體維持缺陷蛋白5抗體 0.1ml
ADORA2B 英文名稱: 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體 0.1ml
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Thr735) /FITC 熒光素標記兔抗人、大,、小鼠磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml